88858cc永利官网提供优质细胞培养服务，以下是关于A549细胞系的培养条件及操作步骤的重要信息。

培养条件

气相组成：95%空气 + 5%二氧化碳

温度：37℃

本细胞系由DJGriad通过58岁白人男性肺癌组织移植建立。A549细胞能够通过胞苷二磷酸胆碱途径合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂。

传代方法

传代建议为1:2，换液每两天进行。

为确保细胞在运输过程中的良好状态，收到细胞后请尽快处理，并用完全培养液灌满培养瓶口。

细胞传代步骤

若细胞未超过80%汇合度，请将瓶中完全培养液收集至离心管，保留5ml培养基放入37℃、5%CO2的孵箱中。若细胞密度超过80%，则可进行传代。

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS轻洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后添加5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2细胞培养箱中。

悬浮细胞传代步骤

1. 半换液法：将培养瓶竖置，静置1小时后，轻轻吸掉3ml培养基，补充3ml完全培养基。若培养基变色缓慢，可直接加500ul FBS。
2. 离心换液法：如需分瓶，将细胞悬液收集于离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液重悬，然后按1:2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml新的完全培养基。

细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩后添加5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速置入37℃水浴解冻，待无结晶后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放于37℃、5%CO2培养箱中。
4. 第二天更换新鲜完全培养基以继续培养。

注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会脱离，这是正常现象。如脱离较多，可收集培养液离心处理，并进行重悬与传代，确保细胞生长活力。

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