在实验室中，培养细胞的条件是至关重要的。以下是细胞培养的基本要求和步骤，以确保细胞在最佳状态下生长：

培养条件

细胞培养所需的气相为95%空气和5%二氧化碳，温度设定为37℃，培养基采用MEM（最小必需培养基）中添加10% FBS（胎牛血清）和1% P/S（青霉素-链霉素混合液）。

传代方法

首次建议以1:2的比例进行细胞传代。当细胞汇合度低于80%时，可以将培养瓶中的完全培养液转移至离心管中，留出5ml的培养基放入37℃、5% CO₂孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可直接进行传代。

培养液更换

建议每隔2天更换培养液，以确保细胞获得充足的营养。

细胞处理注意事项

收到细胞后，应立即用75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后在超净操作台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中稳定3-4小时后再进行后续处理。细胞生长状态良好时，应充满完全培养液并封闭瓶口，以减少运输过程中的损失。

细胞生长观察与记录

使用显微镜观察细胞生长情况，并记录不同倍数下的细胞照片（优先拍摄40x、100x、200x）。前三天的观察照片是售后服务的重要依据，若未提供照片，则默认状态良好。

细胞传代步骤

对贴壁细胞的传代步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用无钙镁PBS对细胞进行1-2次洗涤。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞情况，若细胞大部分变圆并脱落，立即添加5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打使细胞完全脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。

细胞冻存与复苏

细胞生长至80%覆盖时，弃去培养液并用PBS清洗一次，加入0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩后终止消化，离心后重悬细胞，并加入冻存液进行冻存。冻存细胞可直接放入-80℃冰箱保存，若后期需要转移至液氮罐中，需存放24小时后再转入。

注意事项

在运输过程中，部分细胞可能脱落，这是正常现象。如果发现细胞大量脱离，可收集培养液，进行离心分离后重新传代。确保一切操作在88858cc永利官网的推荐标准下进行，以提高细胞培养的成功率。